革蘭氏染色法之操作

一、何謂革蘭氏

        了解革蘭氏染色之化學原理並練習染色法如何將細菌分為革蘭氏陽性與革蘭氏陰性菌。本法為現行菌種初步鑑定中最常見者且為重要的分類依據。染色過程需要四種溶液：鹼性染劑、媒染劑包含酸性、鹼性、金屬鹽類或碘：用為增加染劑對菌體之親和力，協助將染劑固定在細胞上，使之呈色、脫色劑及對比染劑：一種鹼性染劑，使經脫色的菌體再呈色。 
二、材料與設備
        (一) 材料 1. 結晶紫 2. 碘液 3. 95%乙醇 4. 番紅 (二) 設備 1. 酒精燈（或本生燈） 2. 電熱板 3. 接種環 4. 玻片 5. 吸水紙 6. 拭鏡紙 7. 染色盤 8. 顯微鏡

三、方法與步驟 

 1. 拭淨玻片。 

2. 以無菌操作，每菌分別製備一抹片之外，另Escherichia coli及Staphylococcus 

aureus 混合置備一抹片。於空氣中乾燥，熱固定後備用。 

3. 將塗抹覆以結晶紫，靜置一分鐘。 

4. 以蒸餾水輕洗。 

5. 覆以革蘭氏碘液媒染劑，靜置一分鐘。 

6. 以蒸餾水輕洗。 

7. 以 95%乙醇脫色，勿脫色過度，逐滴滴下，至發現結晶紫未自塗抹中釋出為度。 

8. 以蒸餾水輕洗。 

9. 以番紅複染 45 秒。 

10. 以吸水紙吸乾，並用油鏡觀察。 

需要試劑	反應和細菌外觀		染色時間
	革蘭氏陽性	革蘭氏陰性
結晶紫	細胞染成紫色	細胞染成紫色	1分
碘液	在細胞內形成CV-I複合物,細胞殘留紫色	在細胞內形成CV-I複合物,細胞殘留紫色	1分
乙醇	細胞壁脫水,發生多孔性收縮,降低CV-I滲出細胞,細胞成紫色	脂質從細胞壁被抽出,增加多孔性,而CV-I從細胞移出,呈無色	30秒
沙番紅	細胞不受影響	便成粉紅色	1分

四、結果

金黃葡萄球菌(革蘭氏陽性菌)

大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)